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DAB即二氨基联苯胺(3,3’-diaminobenzidine)，是过氧化物酶(Peroxidase)的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。用于检测过氧化物酶的活性，本身具有灵敏度高，特异性好等特点。是HRP结合物最常用的底物，常在免疫组化、原位杂交和Western Blot等膜显色或检测细胞或组织内源性的过氧化物酶中应用广泛。

• 收到货后请将溶液A分装在5支棕色离心管中，避光冷冻保存，随用随取，避免反复冻融。
  
• 溶液A在使用之前，37℃温育10min，以免产生沉淀。
  
• 显色时间需要严格控制，一般10min左右。以免造成过度显色，而且显色后数小时将会褪色。
  
• 溶液C加入过量可能会产生颗粒状沉淀，请控制溶液C的添加量，沉淀不影响判定结果，但会影响观察。
  
• 请使用完后，将反应液、溶液A和溶液C的盖子旋紧，以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。
  
• 推荐所配试剂的量适合于6×8cm的膜，如果膜较大，请适当增加所配试剂的量以便完全覆盖膜。
  
• 请正确配制Western Blot所需要的试剂，正确的膜转移，抗体的稀释和冲洗步骤，以保证能够显色和减少杂带的产生。
  
• DAB在常温下不稳定，易氧化分解，溶液A在-20℃避光的环境中保存，同时做好防护，因为溶液A有一定的致癌性。
  
• 显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。
  
• 请将沾有溶液A的容器等放在含有3% KMnO4或2% Na2CO3的溶液中浸泡3h，以减少污染。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等目的，由此产生的后果概不承担责任。

• 在免疫印迹(Western Blot)实验中先将相应的HRP(辣根过氧化氢酶)标记的二抗覆盖膜后，置于37℃振荡器上振荡1～1.5h，再用1×TBST或1×PBST洗涤膜3～4次，最后一次用1×TBS或1×PBS洗涤膜。
  
• 显色前，再将膜转移到阴暗处，先取反应液10mL吸取到一个15mL的干净棕色瓶子中，再依次取200μL左右的溶液A和2μL的溶液C，形成显色工作液并充分混匀。
  
• 在阴暗处将显色工作液加入膜上，将膜覆盖。37℃低速振荡反应10min左右即可，这时浅棕色的条带出现。
  
• 倒掉反应液，双蒸水冲洗条带3～4次，自然干燥，照像记录实验结果。
  
• 免疫组化显色步骤同上。